檢測(cè)認(rèn)證人脈交流通訊錄
鏈霉素(Streptomycin)快速檢測(cè)試劑盒
- 這真不是您需要的產(chǎn)品?
- 品 牌:
- 艾瑞德生物
- 一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗鏈霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物鏈霉素的含量。
二、試劑盒特性
試劑盒靈敏度: 0.5ppb
樣本檢測(cè)下限
雞肉、雞肝、牛奶—————————————20ppb
蜂 蜜/蜂王漿— —— — —— — —— —————10ppb
交叉反應(yīng)率
鏈霉素 — — —— —— — — — — —— — — 100%
雙氫鏈霉素 ——————— —— — — —— —108%
卡拉霉素 —— — — — — — — — — — — — — < 1%
慶大霉素 — — —— — — — — — — — —— — < 1%
回收率
牛 奶— —— —— —— —— —— —— —95±15%
雞肉組織— —— —— —— —— —— —— —85±10%
蜂蜜/蜂王漿 — —— —— —— —— —— —75±15%
三、試劑盒組成
1、 微量測(cè)試孔:每條8孔,一板12條
2、 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
3、 酶標(biāo)記物 7ml ……………… 紅色帽
4、 抗體工作液 7ml ……………… 藍(lán)色帽
5、 底物液 A液 7ml ……………… 白色帽
6、 底物液 B液 7ml ……………… 黑色帽
7、 終止液 7ml ……………… 黃色帽
8、20×濃縮洗滌液 40ml ……………… 白明帽
9、10×濃縮復(fù)溶液 50ml ……………… 透明帽
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:微孔板、酶標(biāo)儀、勻質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:?jiǎn)蔚?20ul~200ul、100ul~1000ul多道 250 ul
試 劑:濃磷酸、氫氧化鈉、Na2HPO4?12H2O、NaH2PO4?2H2O、正己烷
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時(shí),都必須注意:
(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理需配制:
配液1、將濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:9稀釋(1份濃縮復(fù)溶液+9份去離子水)。
配液2、0.05M PB溶液
13.0gNa2HPO4?12H2O+2.2gNaH2PO4?2H2O加去離子水定溶至1L。
配液3、0.04M磷酸溶液
1ml濃磷酸加去離子水定溶至360ml。
配液4、1M NaOH溶液
稱取4g NaOH加去離子水定溶至100ml。
(a)牛奶樣本的處理方法
1、 取牛奶1ml,按1:39稀釋,混合30s。(50 ul牛奶+1950 ul稀釋后的復(fù)溶液)
2、 取50ul用于分析。
稀釋倍數(shù):40
(b)雞肉、雞肝樣本的處理方法
1、 取2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本與8ml 0.05MPB緩沖液混合5min,置56℃水浴環(huán)境放置30min;
2、 室溫4000r/min以上,離心10min;
3、 取1ml上清液加入1ml正己烷,充分混勻,室溫4000r/min以上,離心5min
4、 去上層液體取50ul下層液,加入450ul 稀釋后的復(fù)溶液混勻,混合30s;
5、 取50ul用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):40
(c)蜂蜜、蜂王漿:
1、 稱量2±0.05g 樣本加入4ml 0.04M磷酸,振蕩至完全溶解,
2、 室溫4000r/min以上,離心5min,直至清亮。(蜂蜜樣本可不用離心直接進(jìn)行第3步)
3、 加入450ul 1M NaOH將PH值調(diào)至7-9之間.(蜂王漿樣本需將全部上清移至另一干凈離心管中調(diào)節(jié)PH值至7-9之間)
4、 室溫4000r/min以上,離心5min ,直至清亮。
5、 取50ul上清液,加入450ul稀釋后的復(fù)溶液混勻,混合30s;
6、 取50ul用于分析。
稀釋倍數(shù):20 檢測(cè)下限:10ppb
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
測(cè)定前應(yīng)須知:
1、 使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫(20-25℃)。
2、 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
4、 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
操作步驟:
1、 從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,置室溫(20-25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出需要數(shù)量的微孔及框架,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。
3、 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
4、 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl /孔,然后加酶標(biāo)記物50μl/孔,再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板,37℃環(huán)境反應(yīng)40min。
6、 取出用洗滌液按每孔250ul,洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
7、 顯色:每孔加入底物A液50ul,再加底物B液50ul,輕輕振蕩混勻,37℃環(huán)境中避光顯色20min。
8、 測(cè)定:每孔加入終止液50μl,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測(cè)定每孔OD值。
蘇州艾瑞德生物科技有限公司
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