檢測(cè)認(rèn)證人脈交流通訊錄
倉(cāng)鼠脂聯(lián)素含C1Q和膠原域(adipoq)ELISA試劑盒
- 上海篤瑪生物科技有限公司代理的品牌:試劑:Sigma、TCI、Amresco、Aldrich、Fluka、MERCK、Roche
生物試劑及耗材:R&D、Abcam、santan cruz、CST、 Cayman、ClioCell、Gibco、Invitrogen、Axygen、Costar、Gilson、Eppendorf、Nichipet、Dragonmed、GE Healthcare等
倉(cāng)鼠脂聯(lián)素含C1Q和膠原域(adipoq)ELISA試劑盒
試劑盒組成:48孔/96孔
保存:2-8℃
主要用途:科研檢測(cè)
檢測(cè)原理:ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù).
種屬包括:人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚(yú)等等
規(guī)格:48T/96T(可提供定性定量)
篤瑪生物實(shí)驗(yàn)操作步驟:倉(cāng)鼠脂聯(lián)素含C1Q和膠原域(adipoq)ELISA試劑盒
取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)簻?zhǔn)備小試管6 只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul 加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
洗板:用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙徹底拍干。
顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
讀板:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。
注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。
數(shù)據(jù)計(jì)算:倉(cāng)鼠脂聯(lián)素含C1Q和膠原域(adipoq)ELISA試劑盒
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng):倉(cāng)鼠脂聯(lián)素含C1Q和膠原域(adipoq)ELISA試劑盒
實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免第一孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
孵育:嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn),可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商聯(lián)系,如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
安全性
1. 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
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