本產(chǎn)品是一種即用型的總蛋白濃度測(cè)定試劑盒，由一系列確定濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液組成。BCA試劑盒可通過(guò)測(cè)量562nm處的吸光度并與蛋白標(biāo)準(zhǔn)物的吸光度-濃度曲線進(jìn)行比較，快速測(cè)定總蛋白濃度。蛋白質(zhì)定量過(guò)程可以在45分鐘內(nèi)完成。
該產(chǎn)品基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物。同時(shí)將Cu2+還原成Cu+。該測(cè)定法的紫色反應(yīng)產(chǎn)物是由兩個(gè)BCA分子與一個(gè)亞銅離子螯合形成的。 這種水溶性復(fù)合物在562nm處表現(xiàn)出很強(qiáng)的吸光度，在較寬的工作范圍 (20-2,000μg/ ml) 中， 隨著蛋白質(zhì)濃度的增加，吸光度幾乎呈線性。
BCA方法不是真正的端點(diǎn)方法，也就是說(shuō)最終顏色會(huì)繼續(xù)變化。但是孵育后顏色變化的速度足夠慢可以允許分析大量的樣品。據(jù)報(bào)道蛋白質(zhì)的大分子結(jié)構(gòu)，肽鍵的數(shù)量以及四種特定氨基酸 (半g氨酸、g氨酸、s氨酸和l氨酸) 的存在與BCA的顏色形成有關(guān)。對(duì)二肽、三肽和四肽的研究表明顏色形成的程度不僅僅是由單個(gè)產(chǎn)生顏色的官能團(tuán)的總和引起的。
因此通常參考諸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常見(jiàn)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。一系列確定濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)物一起進(jìn)行測(cè)定，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定每個(gè)待測(cè)物的濃度。如果需要精確定量待測(cè)蛋白質(zhì)，建議選擇質(zhì)量與待測(cè)蛋白質(zhì)相似的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。例如在測(cè)定免疫球蛋白樣品時(shí)，可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 標(biāo)準(zhǔn)品。在介紹的兩種檢測(cè)法中，其中試管檢測(cè)法需要更大體積 (0.1mL) 的蛋白質(zhì)樣品，但是由于它使用的樣品與工作試劑之比為1:20 (v / v)，因此干擾物質(zhì)的影響降至低。
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