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PCR擴(kuò)增試劑盒的技術(shù)原理

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　　操作步驟　　1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。　　10×PCRbuffer5μl 　　dNTPmixl4μl 　　引物1（10pM）2μl 　　引物2（10PM）2μl 　　Taq酶（2U/μl）1μl 　　DNA模板（50ng-1μg/μl）1μl 　　加ddH2O至50μl 　　視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。　　2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃40s→58℃30s→72℃60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃保溫7min。　　3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。　　4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。　　技術(shù)原理：　　DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。　　在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（DNA高溫變性低溫復(fù)性）　　發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。　　PCR擴(kuò)增試劑盒如有需要?dú)g迎訪問(wèn)以下網(wǎng)址與我們?nèi)〉寐?lián)系　　http://www.bioke.cn/Products-21142753.html 　　https://www.hbzhan.com/st638008/product_21142753.html

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